ß-galaktozidaz ve glukoz izomeraz'ın eupergit desteğe kovalent immobilizasyonu ve immobilize enzimlerin laktoz hidrolizi ve glukoz izomerizasyonunda kullanılması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Çukurova Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2007
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: DİLEK ALAGÖZ
Danışman: Seyde Seyhan Tükel
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Kluyveromyces lactis'den izole edilen ß-Galaktozidaz ve Streptomyces rubiginosus'dan izole edilen Glukoz İzomeraz (GI) Eupergit C 250 L üzerine kovalent olarak immobilize edilmiştir. Belirlenen optimum koşullarda serbest ve immobilize GI için maksimum aktivite sırasıyla 5000 ve 98092 U/g proteins olarak ölçülmüş, KM değerleri sırasıyla 423 ve 2602 mM olarak belirlenmiştir. Bu sonuçlar immobilize GI'ın katalitik etkinliğinin serbest GI'dan yaklaşık 3 kat daha yüksek olduğunu göstermektedir. İmmobilize GI'ın tekrar kullanılabilirliği kesikli, karıştırmalı reaktör modelinde araştırılmış ve 18 kullanımdan sonra immobilize GI'ın başlangıçtaki aktivitesinin %85'ini koruduğu belirlenmiştir. Serbest ve immobilize GI'ın farklı sıcaklıklarda belirlenen termal kararlılıkları karşılaştırılmış ve 60ºC'de 18 saat inkübe edilen immobilize GI'ın başlangıç aktivitesinin % 84'ünü, serbest GI'ın ise aynı koşullarda başlangıç aktivitesinin yaklaşık % 78'ini koruduğu belirlenmiştir. İmmobilize GI'ın 5°C ve 25°C'de 6 hafta depolanma süresi sonunda kalan aktivitesi sırasıyla başlangıç aktivitesinin %71 ve %43'üdür. Bununla birlikte serbest GI, 5°C ve 25°C'de 4 hafta depolanma süresi sonunda sırasıyla başlangıç aktivitesinin %88 ve %78'ini korumuştur. Belirlenen optimum koşullarda serbest ß-Galaktozidaz için KM ve Vmax değerleri sırasıyla, 933 mM ve 1,7x105 ?mol glukoz dk-1 g protein-1 olarak hesaplanmıştır. Bu çalışmada, denenen koşullarda immobilize ß-Galaktozidaz'ın hidrolitik aktivitesinin düşük olduğu, ancak hidrolitik aktivitesine ek olarak beklenenin aksine daha büyük oranda transgalaktozilasyon aktivitesini gösterdiği saptanmıştır. Anahtar Kelimeler: Glukoz izomeraz, ß-galaktozidaz, kovalent immobilizasyon, Eupergit