Kırmızı kan hücrelerinden katalaz enziminin saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Çukurova Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 1996

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: SİBEL PÜRÇÜKCÜ

Danışman: Seyde Seyhan Tükel

Özet:

45 ÖZET Bu çalışmada kırmızı kan hücrelerinde sitoplazmada çözünmüş halde bulunan katalaz enzimi diyaliz, DEAE-sefadeks (A-50) ve CM-sefadeks (C-50) iyon değiştirici kromatoğrafi yöntemleri kullanılarak kısmen saflaştırılmıştır. Katalaz enzimi tüm insan hücre ve organlarında bulunmakta fakat en yüksek aktivitesini eritrositler, karaciğer ve böbrekte göstermektedir. Bu çalışmada eritrositlerin kullanılmasının nedeni eritrositlerde çekirdek, mitekondri gibi hücre organellerinin olmaması ve eritrositlerin sağlanabilmesinin kolay olmasıdır. Hemoliz edilmiş tam kanda katalaz enziminin spesifik aktivitesi 3855 Ul/mg prot. bulunurken, DEAE-sefadeks (A-50) kolonundan alınan fraksiyonlarda en yüksek spesifik aktivite l,60xl05 Ul/mg prot. ve CM-sefadeks (C-50) kolonundan alınan fraksiyonlarda en yüksek spesifik aktivite 4.73xl05 Ul/mg prot. olarak bulunmuştur. Bu bulgularımıza göre katalaz enzimi tam kandaki katalaz enzimine göre DEAE-sefadeks (A-50) jel kromatoğrafisinden sonra 42 kat, CM-sefadeks jel kromatoğrafisinden sonra ise 123 kat saflaştırılmıştır. Saflaştınlan katalaz enziminin hidrojen peroksit ve t-bütil hidroperoksitin değişik derişirnlerindeM spesifik aktivitelerine bakılmış ve hidrojen peroksit için Km değeri 5 mM bulunmuştur. t-Bütil hidroperoksit için ise Vmak 3,51x1ü4 Ul/mg prot. ve Km değeri ise 0,025 mM bulunmuştur. Ayrıca enzimin 15, 22, 37, 45 ve 50°C sıcaklıklardaki aktivite değişimine bakılmış ve elde edilen Arrhenius eğrisinden 15-42°C sıcaklık aralığında aktivasyon enerjisi 350 cal/mol olarak hesaplanmıştır.